酶标仪的原理、分类、应用及选购

2022-08-01 18:34:06  信息编号：K223042  浏览次数：946

酶标仪的原理

酶标仪的原理|结构

酶标仪即酶联免疫检测仪，是酶联免疫吸附试验的专用仪器。可简单地分为半自动和全自动2大类，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一个比色计，即用比色法来分析抗原或抗体的含量。

酶标法是什么

酶联免疫吸附试验方法简称酶标法，是标记技术中的一种，是从荧光抗体技术，同位素免疫技术发展而来的一种敏感，特异，快速并且能自动化的现代技术。

酶标法的基本原理是将抗原或抗体与酶用胶联剂结合为酶标抗原或抗体，此酶标抗原或抗体可与固相载体上或组织内相应抗原或抗体发生特异反应，并牢固地结合形成仍保持活性的免疫复合物。当加入相应底物时，底物被酶催化而呈现出相应反应颜色。颜色深浅与相应抗原或抗体含量成正比。

由于此技术是建立在抗原-抗体反应和酶的GX催化作用的基础上，因此，具有高度的灵敏性和特异性，是一种极富生命力的免疫学试验技术。

酶标仪的原理

酶标仪就是应用酶标法原理的仪器，酶标仪类似于一台变相光电比色计或分光光度计，其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同。

光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光，进入塑料微孔极中的待测标本.该单色光一部分被标本吸收，另一部分则透过标本照射到光电检测器上，光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号，电信号经前置放大，对数放大，模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算，Z后由显示器和打印机显示结果。

微处理机还通过控制电路控制机械驱动机构X方向和Y方向的运动来移动微孔板，从而实现自动进样检测过程。而另一些酶标仪则是采用手工移动微孔板进行检测，因此省去了X，Y方向的机械驱动机构和控制电路，从而使仪器更小巧，结构也更简单。

微孔板是一种经事先包理专用于放置待测样本的透明塑料板，板上有多排大小均匀一致的小孔，孔内都包埋着相应的抗原或抗体，微孔板上每个小孔可盛放零点几毫升的溶液。其常见规格有40孔板，55孔板，

酶标仪的分类|用途

酶标仪是对酶联免疫检测实验结果进行读取和分析的专业仪器，广泛地应用在临床检验、生物学研究、农业科学、食品和环境科学中。酶标仪分类方式一般可以按照滤光方式的不同和功能的不同进行划分。

酶标仪的分类

酶标仪按照滤光方式的不同可分为：滤光片式的酶标仪和光栅式酶标仪。酶标仪按照功能可以分为：光吸收酶标仪，荧光酶标仪，化学发光酶标仪和多功能的酶标仪。

滤光片式的酶标仪：

采用滤光片来进行波长的选择，酶标仪内置滤光片轮，可选择试验所需的不同波长的滤光片来进行分光，光源发出的全波谱光经过滤光片后，大部分被过滤，只剩下滤光片本身允许的波长通过，这样就可就通过滤光片来获得特定的波长。

优点：通过选择不同的滤光片可获得不同的波长。

缺点：因滤光片固定所以波长都是固定，并且滤光片价格比较昂贵。

光栅式酶标仪：

采用光栅进行分光，光源发出的全波谱光线经过光栅后，通过光栅上面分布的一系列狭缝的分光，就可以获得任意波长的光，波长连续可调，一般递增量为1nm。

优点：使用方便灵活，可以进行全波长的扫描。

缺点：价格贵。

光吸收酶标仪：

用来进行可见光与紫外光吸光度的检测。特定波长的光通过微孔板中的样品后，光能量被吸收，而被吸收的光能量与样品的浓度呈一定的比例关系，由此可以用来定性和定量的检测。

优点：检测检测技术成熟，成本低，操作简单。

缺点：动态范围窄，灵敏度比较低，特异性不强。

荧光酶标仪：

用来进行荧光的检测。通过激发光栅分光后的特定波长的光照射到被荧光物质标定的样品上后，会发出波长更长的发射光，通过发射光栅后到达检测器。荧光的强度与样品的浓度呈一定的比例。

优点：灵敏度高，可实时检测，使用方便，检测模式多样。

缺点：易受外界干扰，激发光与发射光容易互相影响。

化学发光酶标仪：

酶标仪根据生物化学反应中的自发光，可分为辉光型和闪光型两种类型。辉光型发光持久，

酶标仪检定规程

酶标仪在实验室中的应用越来越普及，酶标仪的检定也就越来越重要。酶标仪的检定内容主要包括干涉滤光片波长误差及重复性、吸光度误差、稳定性和重复性、仪器灵敏度、通道差异及吸光度的线性。

吸光度示值稳定性(r)的检定：

选用492nm波长或仪器特有的专一波长，将吸光度标称值为1.0A的光谱中性滤光片，平放在微孔酶标板的空板架上，以空气为参比，测量并记录酶标仪的初始吸光度示值(A0)，5min、10min后分别再测一次。吸光度示值稳定性(r)计算：r等于后两次吸光度示值的Zda值与A0的差。

波长示值误差和波长重复性的检定：

从酶标仪取出仪器所用有标称波长(λ)的干涉滤光片(405，450，492，620nm)，使用波长示值误差优于±0.5nm的分光光度计，将干涉滤光片用1mm左右铜或铝金属丝悬挂固定于分光光度计比色杯架第二孔右外侧，干涉滤光片平面需与入射光束垂直。以1nm的改变幅度，从低到高，检测各干涉滤光片在(±20)nm范围内的透射比，绘制波长一透射比特性曲线，求出峰值波长(λi)，每片干涉滤光片重复检测三次并求峰值波长均值。

干涉滤光片波长示值误差(△λ)计算：△λ=峰值波长均值-λ;波长重复性(δλ)计算：δλ等于三次检测峰值波长Zda值和Z小值之差。

吸光度示值误差的检定：

先将吸光度标称值(A)分别为0.2，0.5，1.0，1.5的四块光谱中性滤光片(分光光度计附件)，在分光光度计上依次选用405，450，492，630nm波长或酶标仪特有的专一波长，以空气为参比，检测光谱中性滤光片的吸光度。每个滤光片每个波长检测三次，取均值作为该片在该波长下的吸光度标准值(As)。然后，将四块光谱中性滤光片同时平放在微孔酶标板的空板架上，以空气为参比，酶标仪连续测量3次，依次记录仪器吸光度示值，并计算平均值(Ax)。