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如何查看抗体是磷酸化还是非磷酸化

2022-08-03 00:19:01

 什么是磷酸化

磷酸化是将磷酸基团加在中间代谢产物上或加在蛋白质(protein)上的过程。

其中除去磷酸基团的酶称为磷酸酶。

蛋白质磷酸化可发生在许多种类的氨基酸(蛋白质的主要单位)上,其中以丝氨/酸为多,接着是苏氨/酸。



除了蛋白质以外,部分核苷酸,如三磷酸腺苷(ATP)或三磷酸鸟苷(GTP)的形成,也是经由二磷酸腺苷和二磷酸鸟苷的磷酸化而来,此过程称为氧化磷酸化。

另外在许多糖类的生化反应中(如糖解作用),也有一些步骤存在氧化磷酸化作用。



信号传导中的作用:

(1)细胞内的信号蛋白主要分为两大类:一类在蛋白激酶的作用下磷酸化,共价结合ATP所提供的磷酸基团;另一类则在信号作用下结合GTP,通常以GTP取代GDP。



(2)这两种胞内信号蛋白的共同特征是,在信号达到时通过获得一个或几个磷酸基团而被激活,而在信号减弱时能去除这些基团,从而失去活性。

在信号中继网中,某个信号蛋白磷酸化通常造成下游的蛋白依次发生磷酸化,形成磷酸化级联反应。



(3)蛋白质的磷酸化主要集中在肽链中的酪氨/酸、丝氨/酸、苏氨/酸残基上,这些残基上具有游离的羟基,且本身不带电荷,当磷酸化作用后,蛋白质便具有了电荷,从而使结构发生变化,进一步引起蛋白质活性的变化,这也是蛋白质磷酸化的意义所在。


磷酸化和非磷酸化的抗体主要区别有:

1.磷酸化抗体的检测的是出于活性状态(磷酸化)的蛋白。



2.磷酸化抗体只针对磷酸化位点设计,是一种位点特异性的多抗,这到有些单抗的特性。

3.普通抗体的合成(多抗):原核表达蛋白-〉纯化-〉免疫动物-〉收获抗体。



4.磷酸化抗体合成:人工合成含磷酸化位点的多肽-〉人工体外磷酸化-〉链接半抗原-〉免疫动物-〉收获抗体。



5.磷酸化的蛋白很大部分是转录相关因子。

因此使用磷酸化抗体和普通抗体。

检测同一个蛋白,原位检测可能具有不同的细胞定位。

转录因子磷酸化后由细胞质进入细胞核。



6.一般而言,磷酸化蛋白的实验结果与分子功能更直接相关。



非磷酸化抗体是测该蛋白的含量,不能知道其活性状态,磷酸化抗体是测该蛋白的磷酸化水平如何,侧重于了解该蛋白的一种活性状态。



磷酸化抗体主要是针对磷酸化位点制备的,检测该蛋白在细胞受到刺激时该蛋白的变化情况(磷酸化水平增强还是减弱)。



非磷酸化抗体(主要针对非磷酸化位点的肽段制备的)主要检测组织或细胞中该蛋白的表达情况,组织分布或细胞中定位,同时可以作为磷酸化水平变化的内参等.

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