远慕分享96孔板接种细胞步骤

2022-08-04 08:38:01

 为了做试验，细胞铺匀是习见的一种。

但是，有很多人不是特别胜利，散布也不均匀:要么中心密集，四周稀少，要么四周密集，中心光头。

以下是应用96孔板把细胞铺匀，盼望对大家有用!

方式/步调

一、凡是，在96孔板的每个孔中参加100微升细胞悬浮液。

从底部四周的井的左侧添加细胞悬浮液。

参加一半平板后，混杂细胞悬液，不要再参加，持续参加残剩的一半平板。

添加完所有板后，盖上板，用左手轻轻握住板的左侧，用右手轻轻轻敲板的右边沿，留意抓力(我凡是轻敲三次)。

假如它太强或太多次，细胞就会被浓缩和聚积。

顺时针转动盘子(逆时针后果不好)，依次敲击残剩的三面，静置约5分钟，放入37度培育箱中。

对于6孔板、12孔板或24孔板，我在第一个孔中参加少量无血清培育基，动摇并渗透到全部孔的底部，然后用移液管枪将全部孔的底部吸到第二个孔中。

用相同的方式渗透到井底，同期模仿其它井，这样全部井底都是湿的，细胞悬浮液将平放在全部井底。

参加细胞悬液时，能够防止中心参加更多细胞，中心参加更少细胞的现象，细胞疏散更均匀。

留意，参加细胞悬液后，细胞悬液应放在工作台上静置。

这个方式有点慢，可是当你熟练的时候它并不慢。

也能够涂抹，但强度不如96孔板，后果不如96孔板，所以我废弃了渗透井底的方式。

二、参加细胞悬液后，抬起细胞培育板，从底部向上察看光线，看细胞是否聚集。

然后从底部敲击以疏散它。

三、假如试验室有平板振荡器，建议用这个仪器稍微振荡。

后果好，即振幅小、频率高。

四、细胞应当尽可能疏散，大大都细胞处于单一状况。

离心后，完整悬浮!有转移到六孔板上的，就是震撼!摇摆时，不要让细胞液转向，否则细胞会全体被带到中心而不均匀!

五、当一瓶细胞装满后，举行正常处置。

将它均匀地吹进培育瓶中，然后铺上6孔板，每孔2ml。

涂抹后，不用察看直接用酒精棉擦拭，然后放入培育箱中。

稍微向左三圈，向右三圈，先三圈，然后三圈。

基础上，24小时后，每个孔中的细胞将很是均匀。

六、盘算所有所需的液体和细胞数目，混杂均匀，并将其添加到六孔板中。

六孔板呈水平8字形波动。

在显微镜下察看。

假如不均匀，依照上述方式再次动摇。

假如细胞没有计数并直接种植，在种植六孔板的进程中随时动摇混杂瓶。

我凡是顺时针或逆时针动弹瓶子。

七、先高低移动，然后在水平板上左右移动，每个方位移动5-6次，但要害是动摇后直接放入培育箱，不要做太多的活动，如照镜子，否则特别轻易在中心再次聚在一起。