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远慕分享96孔板接种细胞步骤

2022-08-04 08:38:01

 为了做试验,细胞铺匀是习见的一种。

但是,有很多人不是特别胜利,散布也不均匀:要么中心密集,四周稀少,要么四周密集,中心光头。

以下是应用96孔板把细胞铺匀,盼望对大家有用!

方式/步调

一、凡是,在96孔板的每个孔中参加100微升细胞悬浮液。

从底部四周的井的左侧添加细胞悬浮液。

参加一半平板后,混杂细胞悬液,不要再参加,持续参加残剩的一半平板。

添加完所有板后,盖上板,用左手轻轻握住板的左侧,用右手轻轻轻敲板的右边沿,留意抓力(我凡是轻敲三次)。

假如它太强或太多次,细胞就会被浓缩和聚积。

顺时针转动盘子(逆时针后果不好),依次敲击残剩的三面,静置约5分钟,放入37度培育箱中。



对于6孔板、12孔板或24孔板,我在第一个孔中参加少量无血清培育基,动摇并渗透到全部孔的底部,然后用移液管枪将全部孔的底部吸到第二个孔中。

用相同的方式渗透到井底,同期模仿其它井,这样全部井底都是湿的,细胞悬浮液将平放在全部井底。

参加细胞悬液时,能够防止中心参加更多细胞,中心参加更少细胞的现象,细胞疏散更均匀。

留意,参加细胞悬液后,细胞悬液应放在工作台上静置。

这个方式有点慢,可是当你熟练的时候它并不慢。

也能够涂抹,但强度不如96孔板,后果不如96孔板,所以我废弃了渗透井底的方式。



二、参加细胞悬液后,抬起细胞培育板,从底部向上察看光线,看细胞是否聚集。

然后从底部敲击以疏散它。



三、假如试验室有平板振荡器,建议用这个仪器稍微振荡。

后果好,即振幅小、频率高。



四、细胞应当尽可能疏散,大大都细胞处于单一状况。

离心后,完整悬浮!有转移到六孔板上的,就是震撼!摇摆时,不要让细胞液转向,否则细胞会全体被带到中心而不均匀!

五、当一瓶细胞装满后,举行正常处置。

将它均匀地吹进培育瓶中,然后铺上6孔板,每孔2ml。

涂抹后,不用察看直接用酒精棉擦拭,然后放入培育箱中。

稍微向左三圈,向右三圈,先三圈,然后三圈。

基础上,24小时后,每个孔中的细胞将很是均匀。



六、盘算所有所需的液体和细胞数目,混杂均匀,并将其添加到六孔板中。

六孔板呈水平8字形波动。

在显微镜下察看。

假如不均匀,依照上述方式再次动摇。

假如细胞没有计数并直接种植,在种植六孔板的进程中随时动摇混杂瓶。

我凡是顺时针或逆时针动弹瓶子。



七、先高低移动,然后在水平板上左右移动,每个方位移动5-6次,但要害是动摇后直接放入培育箱,不要做太多的活动,如照镜子,否则特别轻易在中心再次聚在一起。

 

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